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          關(guān)鍵詞搜索: 超聲波細胞粉碎機,超聲波清洗機,恒溫水浴,高壓均質(zhì)機,基因導入儀,冷凍干燥機,微生物成長(cháng)曲線(xiàn)分析儀,藥物溶出儀,高低溫循環(huán)裝置,工藝流程溫控系統

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          新芝生物丨超聲技術(shù)在脂質(zhì)體制備中的應用研究

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          01 研究背景

          1.1 脂質(zhì)體

          脂質(zhì)體是一種微型泡囊體,能將藥物包封于脂質(zhì)雙分子層內,具有靶向、緩釋、降低藥物毒性等諸多優(yōu)點(diǎn),迄今已經(jīng)在制藥、醫療、生物化學(xué)、食品科學(xué)、化妝品等多領(lǐng)域廣泛應用。評價(jià)脂質(zhì)體質(zhì)量的指標有外觀(guān)、粒徑分布和包封率等,制備方法不同,脂質(zhì)體的粒徑、結構都不盡相同。脂質(zhì)體在不同領(lǐng)域應用,粒徑是衡量脂質(zhì)體內在質(zhì)量的一個(gè)重要指標,探頭式超聲由于操作簡(jiǎn)便,已成為制備脂質(zhì)體主要制備方法之一,但是由于超聲條件的不同,制備的脂質(zhì)體沒(méi)有很好的重現性。影響超聲效果因素包括輸入功率、作用時(shí)間、超聲頻率等,通過(guò)控制這些因素,可以控制脂質(zhì)體粒徑的變化,從而得到理想大小的脂質(zhì)體。


          02 實(shí)驗方法

          2.1 脂質(zhì)體的制備

          采用逆向蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體,精密稱(chēng)取一定量的卵磷脂、膽固醇、α-生育酚適量混合溶于一定量氯仿中,將脂質(zhì)溶液移入250mL圓底瓶中,氮氣中45℃恒溫水浴減壓去除有機溶劑,直至形成干燥脂質(zhì)薄膜,待有機溶劑去除,停止旋轉,從水浴中提起圓底瓶,加入一定濃度的PBS(pH6.5)溶液旋轉洗膜,在45℃水浴中水合2h即形成乳白色脂質(zhì)體混懸液。

          2.2 脂質(zhì)體溶液的超聲方法

          圖1為本實(shí)驗所用超聲裝置,鈦探針直徑為1.5cm,反應池為一個(gè)開(kāi)放的玻璃燒杯(直徑3cm,高度7.5cm),冰水浴超聲。實(shí)驗設置20%、30%和40%三個(gè)功率百分比,超聲處理脂質(zhì)體,超聲儀探針距杯底深度分別設置為1.5和3.0cm。15ml脂質(zhì)體按上述條件針式冰水浴超聲,超聲5次,每次時(shí)間為4mim(單次超聲30s,間隔30s)。超聲完成后,關(guān)閉超聲使容器冷卻,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除去鈦顆粒雜質(zhì)。激光粒度儀分析超聲對脂質(zhì)體粒徑分布及對分散系數的影響。

          新芝生物丨超聲技術(shù)在脂質(zhì)體制備中的應用研究

          圖1

          a:鈦探針(直徑1.50cm);b:燒杯(直徑3cm,高7.5cm);

          c:大燒杯(直徑7cm,高90cm);d:脂質(zhì)體混懸液;

          e:冰水??;x:探針與燒杯底部距離


          03 實(shí)驗結果

          3.1 超聲功率對脂質(zhì)體粒徑的影響

          不同輸入功率,超聲時(shí)間為20min,脂質(zhì)體超聲后平均粒徑及粒徑范圍分布見(jiàn)附表。結果表明,隨著(zhù)超聲功率的增加,脂質(zhì)體粒徑變小,粒徑分布范圍變窄,說(shuō)明高功率超聲得到的脂質(zhì)體粒徑更均勻。圖2為磷脂含量為10mmol/L脂質(zhì)體超聲前后粒徑圖,超聲之前(圖2A)脂質(zhì)體粒徑呈單峰分布,平均粒徑為300nm左右,隨著(zhù)超聲時(shí)間的增加,超聲20min后能明顯觀(guān)察到粒徑變小,粒徑分布變窄,見(jiàn)圖2B,超聲功率為40%時(shí),20min后獲得粒徑約為70nm左右的單峰分布的脂質(zhì)體。

          附表 超聲輸入功率對脂質(zhì)體粒徑及粒徑分布影響

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          新芝生物丨超聲技術(shù)在脂質(zhì)體制備中的應用研究

          B

          A:超聲前脂質(zhì)體粒徑分布圖;B:超聲20min后脂質(zhì)體粒徑分布圖,輸入功率40%;超聲時(shí)間20min;磷脂含量10mmol/L

          3.2 超聲時(shí)間對脂質(zhì)體粒徑的影響

          如圖3所示,超聲功率分別為20%、25%、30%、35%、40%,增加超聲時(shí)間,磷脂含量為10mmol/L的脂質(zhì)體粒徑變化,結果顯示,隨著(zhù)超聲時(shí)間的增加,脂質(zhì)體粒徑減小,直到20min時(shí)得到一個(gè)穩定的脂質(zhì)體粒徑,不再發(fā)生變化。為了證實(shí)超聲時(shí)間足夠形成穩定的脂質(zhì)體粒徑,增加超聲時(shí)間到25min,考察脂質(zhì)體的粒徑分布。

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          圖3

          3.3 超聲時(shí)間對脂質(zhì)體粒徑的影響

          設定中高低三個(gè)超聲輸入功率20%、30%和40%,燒杯底部和探頭的距離分別為10和15mm。在不同的超聲功率和深度下,超聲時(shí)間不同,得到不同粒徑的脂質(zhì)體。圖4顯示的是磷脂含量為10mmol/L的脂質(zhì)體,應用超聲功率分別為20%、30%和40%,粒徑隨超聲時(shí)間的變化圖,結果表明,隨著(zhù)超聲時(shí)間的延長(cháng),脂質(zhì)體粒徑降低,直到超聲時(shí)間為20min,脂質(zhì)體粒徑不在變化,從圖中還可以看出,隨著(zhù)超聲功率的增加,脂質(zhì)體粒徑降低。應用不同的超聲時(shí)間和不同的深度,獲得的脂質(zhì)體粒徑也不同??紤]到連續的超聲時(shí)間和功率,深度為15mm時(shí),獲得的脂質(zhì)體粒徑更佳。15mm與10mm探針深度獲得的脂質(zhì)體粒徑并沒(méi)有明顯區別,然而在10mm時(shí),脂質(zhì)體空化現象更為明顯,促進(jìn)羥基自由基的形成,造成脂質(zhì)體成分中磷脂的氧化。15mm深度時(shí)磷脂發(fā)生氧化的機率更低。這點(diǎn)在應用不飽和磷脂制備脂質(zhì)體時(shí)尤其重要,因為不飽和磷脂容易氧化。從圖中可以看出,功率越高,超聲得到的脂質(zhì)體分散系分散得越均勻,隨著(zhù)功率的增加,粒徑和分散率降低,但超聲時(shí)間過(guò)長(cháng),超聲探頭會(huì )釋放更多鈦顆粒雜質(zhì),造成污染。因此,超聲條件為探針深度為15mm、超聲功率為40%,超聲時(shí)間為20min時(shí),得到的脂質(zhì)體粒徑和分散度最好。

          新芝生物丨超聲技術(shù)在脂質(zhì)體制備中的應用研究

          A:磷脂含量為10mmol/L,超聲功率分別為20%、30%和40%時(shí)粒徑及分散性隨超聲時(shí)間的變化(探頭深度10mm)

          B:磷脂含量為10mmol/L,超聲功率分別為20%、30%和40%時(shí)粒徑及分散性隨超聲時(shí)間的變化(探頭深度15mm)


          04 討論

          4.1 新芝生物·全球樣品制備專(zhuān)家

          超聲波是由一系列疏密相間的縱波構成的,并通過(guò)液體介質(zhì)向四周傳播。通過(guò)研究脂質(zhì)體制備過(guò)程中超聲對其影響,來(lái)達到控制脂質(zhì)體性質(zhì)的目的,實(shí)驗結果表明,影響脂質(zhì)體粒徑分布范圍和zeta電位的三個(gè)超聲參數分別為:超聲深度、功率輸入和超聲時(shí)間。因此,為獲得的均一性較好的脂質(zhì)體應該從此三方面進(jìn)行探索。

          新芝生物作為全球樣品制備專(zhuān)家,深耕超聲技術(shù)多年,產(chǎn)品功能齊全,超聲產(chǎn)品具有功率調控、時(shí)間調控和超聲深度調控等多方面功能。從用戶(hù)實(shí)際需求出發(fā),能夠為用戶(hù)提供高效率、高性?xún)r(jià)比的產(chǎn)品和解決方案。

          新芝生物丨超聲技術(shù)在脂質(zhì)體制備中的應用研究



          TEL:18106650612

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